標準曲線（standard curve）不是報告裡用來裝飾的斜線。它是一份「在這次條件下，哪些濃度可以被比較」的證據。曲線上的每一點都要有濃度、重複孔（replicate wells）、空白狀態與方法條件；少一個，線就少一層可信度。
先留住零點
零濃度標準（zero standard）不是「沒有資料」，而是告訴我們試劑、緩衝液（buffer）與容器本身造成多少背景。若標準品用樣品相同的稀釋液（diluent）配製，零標準也能作為基質對照（matrix control）。空白扣除（blank subtraction）只能做一次，扣完後仍要保留原始讀值，避免日後無法追查。
Bradford 的標準列裁決
本系列採 Bio-Rad Quick Start Bradford 的 standard microplate 例作為明確示範：
- 加樣比例：每孔 5 µL 標準品或樣品，加 250 µL 1× dye reagent，也就是樣品對試劑 1:50。
- BSA 標準列（standard series）：0、125、250、500、750、1,000、1,500、2,000 µg/mL。
- 預設 BSA 線性擬合（linear fit）：125–1,000 µg/mL。
- 1,500 與 2,000 µg/mL：保留作高範圍檢查，不在預設 BSA 直線中硬擬合。
這不是說高點永遠無用，而是不能把「試劑盒（kit）提供了這個濃度」誤讀成「這個標準在任何蛋白、任何基質、任何讀取器（plate reader）上都適合直線擬合」。若改用 gamma-globulin 或其他蛋白標準，線性範圍（linear range）要依對應產品文件與試跑資料重判。
把曲線放進工具
在濕實驗分析 › 蛋白質定量中，先輸入濃度，再輸入每個標準的重複 A595。第一列標準品作為空白的介面設計很方便，但操作者仍要確認第一列確實是零濃度，而不是把最低濃度誤當空白。工具顯示 R²，不代表可以跳過範圍判讀；高 R² 也可能來自把彎曲的高端一起硬塞進不合適的模型。
內插，不外插
未知樣品只有在標準曲線所支持的範圍內，才是內插（interpolation）。若未知讀值落在上端之外，應先降低待測液（test sample）濃度、重新反應、重新讀值，再把新的預稀釋倍數（predilution factor）寫回紀錄。不要把直線向右延長後，把計算機吐出的數字當作測量結果。
ELISA 的標準曲線常是 S 形（sigmoidal），套組（kit）多用四參數邏輯斯（four-parameter logistic, 4PL）擬合，規則卻相同：只在標準品包住的範圍內回推。對照閱讀〈讓抗體替你數蛋白：ELISA 的原理〉的「從顏色回推濃度」一節。
本文的標準列與比例是方法示例，不能取代現場試劑手冊。實際使用前仍要核對批號、標準蛋白（standard protein）、讀取格式與基質。