Bradford、BCA 和 Lowry 蛋白質定量有什麼差異？

Bradford 利用 Coomassie 染劑結合蛋白質（速度快，但對界面活性劑敏感）。BCA 利用 Cu²⁺ 還原後與 bicinchoninic acid 形成紫色螯合物（可相容界面活性劑，但反應較慢）。Lowry 結合 Folin–Ciocalteu 試劑與銅–蛋白質複合物（靈敏度高，但干擾物較多）。選擇方法取決於樣品 buffer 組成與實驗通量需求。

為什麼蛋白質定量在線性範圍外會不準確？

比色法蛋白質定量的標準曲線只在特定吸光值區間內呈線性。低於偵測下限時，訊號與背景雜訊無法區分；超過上限時，染劑或試劑已飽和，多餘蛋白質不再產生等比例訊號。應在驗證範圍內內插，超出範圍的樣品須稀釋後重測。

如何選擇蛋白質定量的標準曲線範圍？

先參考試劑廠商建議範圍（例如 Bradford 為 0.1–1.0 mg/mL），至少準備 5–6 個標準點涵蓋整個範圍。若未知樣品落在曲線範圍外，應稀釋後重新測量，而非外推至最後一個標準點之外。

研究工作台

蛋白質定量

輸入 Bradford 或 BCA 孔盤讀值，得到標準曲線、R² 與回推濃度。

使用範圍與隱私讀值保留在此瀏覽器

計算會在此頁面執行。您輸入的孔盤讀值不會上傳至伺服器。

孔盤數據

濃度單位

試劑

使用孔數

濃度（µg/mL）· 吸光值 A595

樣品	平均值	CV
標準品
	n/a	n/a
	n/a	n/a
	n/a	n/a
	n/a	n/a
	n/a	n/a
	n/a	n/a

未知樣本
	n/a	n/a
	n/a	n/a

輸入所選孔位的原始 A595 吸光值。沒用到的孔可留白。第一列標準品先當作空白。

讀盤機 CSV 或 Excel 整盤數據：按「匯入讀盤機數據」，選本組欄位即可；也可點一格後直接貼上。

結果

至少輸入兩列標準品讀值，即可查看曲線與樣本估值。

方法探索

切換常見的蛋白質定量方法，比較反應原理、線性範圍與緩衝液相容性。

原理

Coomassie Brilliant Blue 與蛋白質中的鹼性與芳香族胺基酸結合後，染劑會轉為藍色型態。

讀值波長

595 nm

建議線性範圍

0.1 – 1.4 mg/mL

適合情境

快速定量，以及不含太多界面活性劑的簡單緩衝液。

常見干擾

對 SDS 等界面活性劑較敏感；不同蛋白質組成之間的反應也可能偏差較大。

思考問題

當染劑可結合位點開始飽和時，為什麼曲線會逐漸彎曲？

標準曲線互動區

用預設參考曲線操作內插與稀釋倍數，並看出「為什麼不能隨便外插」。

濃度 (mg/mL)	吸光值
0	0.041
0.125	0.117
0.25	0.208
0.5	0.394
0.75	0.573
1	0.742

未知樣本吸光值樣本稀釋倍數

曲線內插濃度0.598 mg/mL

回推原樣本濃度2.991 mg/mL

位於建議線性範圍內。

參考標準曲線（示意）

蛋白質濃度 (mg/mL) · 吸光值

判讀重點

不同方法不能直接互換：反應化學決定了哪些添加物會干擾、哪個濃度區間比較線性。
R² 很高也不代表可以放心外插。若未知樣本超出標準範圍，先思考稀釋策略比硬算數字更重要。
正式報告濃度時，流程要完整：吸光值讀取 → 標準曲線內插 → 再乘回稀釋倍數。