Dot Blot 和 Western Blot 有什麼差別？

Dot Blot 不經電泳分離，直接點膜，速度快（2-4 小時）、通量高，但無法確認分子量。Western Blot 有 SDS-PAGE 分離，可確認目標蛋白大小，但耗時 8-24 小時。

研究工作台

🔬Dot Blot 灰階分析

免費線上 Dot Blot 灰階分析工具。自動偵測膜上斑點、量化強度、背景校正。完全在瀏覽器中運行，取代 ImageJ。

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什麼是 Dot Blot 分析？

Dot blot（點墨漬法）是一種簡化的免疫墨漬技術，將蛋白質或核酸樣本直接以圓形斑點的形式點在膜上，不經電泳分離。透過量化每個斑點的灰階強度，研究者可以比較不同樣本中目標分子的相對含量。

傳統上，這項分析需要桌面軟體如 ImageJ 或商業套件。本工具將相同的功能帶到你的瀏覽器——上傳膜的影像、自動偵測斑點、調整感興趣區域（ROI），即可獲得可供發表的量化結果。

灰階量化原理

灰階影像中每個像素的強度值介於 0（黑色）到 255（白色）之間。對於典型的 dot blot（淺色膜上的暗色斑點），蛋白質越多、斑點越暗、像素強度越低。本工具計算：

平均強度——圓形 ROI 內所有像素的平均值。

積分光密度——平均強度乘以像素數（面積），同時考慮強度和斑點大小。

背景值——每個斑點周圍環形區域的中位數像素值，對鄰近斑點具有穩健性。

校正後強度——背景值減去平均值（暗點模式），消除膜背景的變異。

相對強度——每個斑點的校正值佔最大值的百分比，便於比較。

Dot Blot vs Western Blot：怎麼選？

Dot blot 和 Western blot 都是免疫墨漬技術，但適用場景截然不同：

比較項目

Dot Blot

Western Blot

電泳分離

無（直接點膜）

有（SDS-PAGE 依分子量分離）

分子量資訊

❌ 無法確認

✅ 可確認目標蛋白大小

特異性驗證

低（依賴抗體特異性）

高（分子量 + 抗體雙重驗證）

通量

高（一次可點數十個樣本）

低（受膠體泳道數限制）

時間

2-4 小時

8-24 小時

成本

低（無需電泳設備）

高（膠體、電泳槽、轉印設備）

定量類型

半定量（相對強度）

最佳用途

大量樣本初篩、抗體效價測試、已知目標的相對定量

確認目標蛋白身份、發表級數據、新抗體驗證

經驗法則：如果你已經用 Western blot 驗證過抗體特異性，後續大批量樣本的相對定量可以改用 Dot blot 節省時間。但首次使用新抗體或需要確認分子量時，一定要跑 Western。

Dot Blot vs ELISA

若你需要絕對定量（ng/mL 等確切濃度），ELISA 是更適合的選擇。Dot blot 的優勢在於不需要專用的包覆型微量盤（coated plate），直接點膜即可，適合快速比較相對含量。

最佳操作建議

使用均勻照明拍攝膜的照片。不均勻的光線會產生背景梯度，影響量化結果。

避免過度曝光。若工具顯示 ⚠️ 飽和警告，表示影像中有像素達到最大強度（255），實際訊號可能高於測量值。

加入已知濃度的標準品在每張膜上。雙擊斑點可將其標記為標準品，進行絕對定量。

調整靈敏度若自動偵測遺漏了較淡的斑點或誤偵測了背景雜訊。

常見問題

我的資料會被上傳嗎？

不會。所有影像處理和分析完全在你的瀏覽器中使用 JavaScript 和 Web Worker 執行。你的影像永遠不會離開你的裝置。

與 ImageJ 相比準確度如何？

量化演算法（平均強度、積分光密度、環形背景扣除）在相同影像上的結果與 ImageJ 的 ROI 分析相差在 5% 以內。主要優勢是方便——無需安裝任何軟體。

支援哪些影像格式？

PNG 和 JPEG。超過 4096×4096 像素的影像會自動等比例縮小。

可以分析化學發光（亮點在暗背景上）的影像嗎？

可以。工具會自動偵測斑點是暗底亮點還是亮底暗點。你也可以使用工具列的「暗點/亮點」按鈕手動切換極性。